血生化檢（jiǎn）測

血生化檢測是對實（shí）驗動物血液內離子、脂類、蛋白質和各種酶等（děng）物質濃度的檢測。這些檢測項目的變化一般都與特定器官的功能（néng）有關，對（duì）評估實驗動物健康狀態以及驗證實驗動物造模是否成功等，都具有重要指導意義。由於血生化（huà）涉及項目較多，本號將分兩篇對其進行介紹。

絕大多數血生化檢測都可以用血清或肝素血漿樣本檢測，兩者的檢測結果會有差異，但這（zhè）種差異（yì）並無臨床意義。然而，對於需要長期監測動物，相同指標應在監（jiān）測周期內選擇相同樣本進行檢測。樣（yàng）本的保存和抗凝劑（jì）的使用均應根據不同的檢測項目進行選擇。此外，樣本采集的質（zhì）量可直接影響檢測結（jié）果。

對於大多數血生（shēng）化項目，樣本應在采集後及時檢測（cè），如不能及時檢測（cè），3天內可4℃或冷凍（-20℃或更（gèng）低溫度）保存（cún）；若保存時長超（chāo）出3天，需冷（lěng）凍（-20℃或更低溫度）保存，切忌將樣本反複凍融後（hòu）進行檢測。但一些生化項目低溫保存也會影響其活性，如乳酸脫氫酶和穀草轉氨酶。

尿素、鉀、鈉離子避免使用（yòng）含銨（ǎn）鹽類抗凝劑進行檢測；穀丙轉（zhuǎn）氨酶、肌酸激酶和總（zǒng）蛋白避免使用枸（gǒu）櫞酸（suān）鈉抗凝劑進行檢測。本文僅列出部分生化項的抗凝劑選擇，更多信（xìn）息可參考WHO 2002年發布（bù）的（de）《實驗室檢查中抗凝劑的使用》。

齧齒動物尤其實驗大小鼠的血生化參考範（fàn）圍，目前仍沒有建立標準參考。這與實（shí）驗大（dà）小鼠的品係眾多有關。已有文獻證明，不同品係的小鼠血生（shēng）化會有差異。並（bìng）且血生化的結果與動（dòng）物的年齡和性別等因素相關。另外，由於不同（tóng）機構（gòu）使用的檢測方（fāng）法不同，如幹（gàn）式生化分析儀和濕式生化分析儀，且使用試劑盒品牌不同（tóng）、試劑盒檢測原理不同等，均會導致（zhì）結果（guǒ）不同。這些因素都導致了實驗大小鼠的血生化標準參考範圍（wéi）無法建立，目（mù）前可查到的（de）參考範圍，均應根據內部情況進行參考。

蛋白（bái）質與肝膽功能檢測

1.   總蛋白（Total protein, TP）

血液（yè）等體液中的蛋（dàn）白質種類眾多（duō），但（dàn）目前尚無一種常規檢測技術可以對體液中各種類型蛋白質總量進行準確測定。因此，臨床對體（tǐ）液中總（zǒng）蛋白質（zhì）測（cè）定（dìng）通常是（shì）假設所有的體液蛋白質均是單純蛋白質，且各種（zhǒng）體液（yè）蛋白與化學試劑的反應性均一致。基於以上兩個假設，目前測定總蛋白（bái）最（zuì）常用的方法有雙縮脲（niào）法和紫外分光光（guāng）度法。血清中的總蛋白實際檢測的是除（chú）纖維蛋白原以外的成分，因此用血漿測定總蛋白較血清測定值偏高。

總蛋白的濃度主（zhǔ）要反應（yīng）肝髒合（hé）成（chéng）功能和腎髒病變（biàn）造成蛋白質（zhì）丟失情況，可以用來判斷機體的水合狀態，脫水的動物總蛋白濃度會相對升高，即高蛋白血症。當動物出現慢（màn）性肝髒疾病、骨髓瘤、自身（shēn）免疫性（xìng）疾（jí）病、慢性炎症和感（gǎn）染等，會導致TP和球蛋白同時升高。

過度（dù）水合動物總蛋白濃度會相對降低，即低蛋白血症，此時動物可能會出現浮腫、胸腔或腹腔積液。TP和白蛋白同時降（jiàng）低常見於肝功能受損導致（zhì）蛋白質合成減（jiǎn）少、營養不（bú）良、蛋白丟失過多、消耗增加等病理性因素。

2.   白蛋白（Albumin, ALB）

ALB由肝（gān）實質   細胞合成分泌，是血漿（jiāng）中含量最多的蛋白質，大部分動物的白蛋白占血漿蛋白的（de）35%~50%。ALB是動（dòng）物機體內重要的營養蛋白，參與維持內環境穩定，也是血漿中多種（zhǒng）物質的主要轉運蛋白。當出現炎性疾病、漿細胞瘤（liú）、淋巴瘤、腎小球腎炎、營養（yǎng）不（bú）良、過（guò）度水合等，均會導（dǎo）致齧齒動物出現血清白（bái）蛋白的降低；ALB升高則多見於脫水動物。

3.   球蛋白（Globulin，GLB）

球蛋白可以分為（wéi）α球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白，大（dà）多數α球蛋白和β球蛋白（bái）由肝（gān）髒合成，γ球蛋白由（yóu）漿細胞合成。α球蛋白中比較重要的兩種蛋白質（zhì）分別是高密度脂蛋白和極低密度脂蛋白（bái）；β球（qiú）蛋白（bái）包括補體（C3、C4）、轉鐵蛋白和鐵蛋白；γ球蛋白（即免疫球蛋白）包括IgG、IgD、IgE、IgA和IgM。

球蛋（dàn）白的濃（nóng）度一般通過總蛋白與白蛋白的差值（zhí）來（lái）進行計算。球蛋白減少主要由於合成減少，如使用免疫抑製劑；球蛋白的增加多見（jiàn）於γ球蛋白（bái），常見原因有慢性肝（gān）髒疾病、免疫性疾病、骨髓（suǐ）瘤（liú）等。

4.   白蛋白（bái）/球（qiú）蛋白（A/G）

白球比應結合蛋（dàn）白質指標進行分析，不同種類、品係、年齡、性別（bié）動物的白球比都有差異，很多病理狀態（tài）會（huì）改變（biàn）白球比。當白（bái）蛋白和球蛋白均變化時，如出血導致白蛋（dàn）白和球（qiú）蛋白丟失、脫水導致（zhì）球蛋白和（hé）白蛋白增加時，A/G比值將（jiāng）變化不大或保（bǎo）持在正常範圍內；當其中一個數（shù）值發生變（biàn）化且（qiě）占主導時，那（nà）麽A/G比值將發生異常，如免疫球蛋白的產生導致A/G比值降低、免疫球蛋白缺乏導致A/G比值增高。在（zài）臨床上，ALB、TP、GLB和A/G比值應結合一起進（jìn）行分析。

5.   穀丙轉氨酶（Alanine aminotransferase, ALT）

臨床上廣泛用來作為肝細胞損傷指標，也（yě）是中間代謝的關鍵酶。ALT主要（yào）存在於肝髒，但也廣泛存在於腎髒、心（xīn）肌、骨骼肌、胰（yí）腺等組織中，這些組織出現損傷或壞死，也會導致（zhì）血清ALT水平升高。由於ALT主（zhǔ）要存在於細胞質，釋放（fàng）比較容易，因此ALT升高可出現在組織損傷早期。血液中ALT的水平與肝損傷的嚴重程度不呈現相關性，ALT通常會在肝損傷12h內升高，並在24~48h內達（dá）到峰值，除非存在慢性肝損（sǔn）傷，一般情況下血清ALT水平會在幾周內恢複正常（cháng）。比較特（tè）殊的是，豚鼠中ALT活性（xìng）較低，因此ALT不適合用來作為判斷其肝損傷的標誌物。

目前已發現在人類、大小鼠和狗（gǒu）中，ALT具有兩種亞型，分（fèn）別為ALT1和ALT2，其中ALT1主要在腎髒、肝髒、脂肪和心組織中表達；而ALT2主要在肌肉和脂肪中表達。在小鼠中，ALT2被認為是脂肪變性的標誌物。ALT亞型的區分可以更精準（zhǔn）反應器官損傷情況，但目前ALT分型（xíng）的檢測尚未（wèi）廣（guǎng）泛應用在（zài）實驗動物（wù）檢測中。

6.   穀草轉氨酶（Aspartate aminotransferase, AST）

AST主要存在於肝細胞內，在正常大鼠血清中，細胞質中的AST約占總AST活性82%，線粒體膜（mó）上的AST約占總AST活性18%。此外（wài），AST也存（cún）在於其（qí）他組織中，如心髒、骨骼肌、腎髒、胰腺等，這些組（zǔ）織損傷或壞（huài）死時，血清中AST也會升高。AST水平升高表示非特異性肝髒損傷，齧（niè）齒（chǐ）動（dòng）物在應激狀（zhuàng）態或肌內注射也可能導致AST升高，AST升高（gāo）應先檢查血清或（huò）血漿樣本是否溶血（xuè），結合肌酸激酶水平（píng），排除是否為肌肉損傷導致（zhì）AST升高，上（shàng）述原因排除後，方可考慮為肝損傷導致AST升高。

7.   堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase, ALP）

ALP是一組在酸性（xìng）條件下水解磷酸單酯類化合（hé）物的酶，在許多組（zǔ）織中存在其同工酶（méi），尤其是肝膽係統、骨骼內的成骨細胞、軟骨內的成軟骨細（xì）胞、腸道細胞。ALP水（shuǐ）平與齧齒類動物的年（nián）齡及性（xìng）別具有相關性，處於生長期的未成年動物ALP水平較高，隨著動物年齡的增長，ALP水平明顯降低；且大多數雌性動物ALP水（shuǐ）平低於雄性動物。而ALP的病理（lǐ）性升高（gāo）則常見於發生肝膽疾（jí）病、骨骼疾病、惡性腫瘤時的動物（wù）。

8.   γ-穀氨酰轉移酶（Gamma-glutamyltransferase, GGT）

GGT存在於許多組織中，包括腎髒、胰腺（xiàn）、腸道和肌細胞。GGT升高多見（jiàn）於動物發生肝髒（zāng）疾病、膽管阻塞以及（jí）急性胰腺炎等。需（xū）要注意的是，GGT在腎髒中濃度最高，但發生腎髒疾病（bìng）時，GGT的（de）增加並不明顯，這是因為GGT會從受（shòu）損的管狀上皮細胞中釋放到尿液中，而不是（shì）血液中。

9.   膽紅素（sù）（Bilirubin, Bil）

膽紅素（sù）是一（yī）種不可溶性分子，由脾（pí）髒內巨噬細胞降解血紅蛋白產生，是各種含血紅素蛋白中的血色素（sù）在一些係列酶作（zuò）用（yòng）下的降解產物，與脂類的消化吸收及黃疸形成具（jù）有重要關係。膽紅素（sù）在光照下分解（jiě），因此，樣本應避光保存（cún）以保證結果準確（què）性。當動物出現膽汁（zhī）運輸障（zhàng）礙（ài）或腸道吸（xī）收不良時，會導致膽紅素降低；當動物（wù）出現溶血（xuè）性疾（jí）病導致紅細胞破壞或內出血時，可使膽紅素含量增高。

10.  膽汁酸（Bile acids, TBA）

齧齒動物的（de）膽汁酸（suān）代謝（xiè）與人類有所不同，大小鼠的膽汁酸以膽固醇為原料在肝細胞中合（hé）成，由肝源性分子組成，並主要與牛磺酸結合。膽汁酸可以促進脂類的消化吸收、調節膽固醇的代謝以及（jí）促進膽汁分泌（mì）。當動物出現肝功能受損、膽道阻塞等疾病時，均（jun1）會導致膽汁酸水平增加。

腎髒功能檢測

1. 尿素（Urea）

尿素（sù）是哺乳動物蛋白質代謝的主要終末（mò）產物，可自由濾過腎小球，當（dāng）腎實質受損時，腎小球濾過率下降，血尿素濃度會升高，因此可以通過（guò）測定尿素水平來評估腎功能。需（xū）要注意（yì）的是，產尿酶菌（如金黃色葡萄球菌/變形杆菌屬/克雷伯菌屬（shǔ））汙染的血液樣本可導致尿素分解，導致尿素水平下降，為避免這種情況，樣本采集後應及（jí）時進行（háng）檢測，如不能（néng）及時檢測，應將（jiāng）樣本放置在冰箱冷藏中保存。另（lìng）外不（bú）同性別及年齡差異（yì），也會影響尿素水平，隨著動物年齡增長，尿素水平會呈現下降趨勢（shì）。尿素的增加多見（jiàn）於高蛋白飲食、脫水以及（jí）腎（shèn）功（gōng）能衰（shuāi）竭等。

2. 肌酐（Ceatinine, Crea）

血肌酐經腎小球濾過進入原尿，並且不被腎小管重新吸收，機體內肌酐應保持恒定（dìng），因此測定血肌酐水平可以用來（lái）評估腎功能。但是和尿素一樣，肌酐不是腎（shèn）功能的（de）準確指（zhǐ）標，當腎功能（néng）損傷近75%時，方可引起血（xuè）肌酐水平升高。肌酐降低則多見於動物營養不良、貧血等。

3. 尿（niào）酸（Uric acid, UA）

尿酸是嘌呤（lìng）堿（jiǎn）基代謝（xiè）產物，主要存在於肝髒中，小部分（fèn）可經（jīng）肝髒（zāng）隨膽（dǎn）汁排泄。尿酸可自由濾過腎小球，也可腎小（xiǎo）管排泄。因此，排除外源性尿酸幹擾，血尿酸可反映腎小球濾過功能和腎小（xiǎo）管（guǎn）重（chóng）吸收功（gōng）能。當機體出現急性或慢性腎炎、多發性骨髓瘤等均會（huì）導致UA升高；肝髒（zāng）壞死、肝功能（néng）衰竭等（děng）病理原因則會導致UA降低。