簡介

盡管存在解剖（pōu）和生理上的差異，小鼠在研究人類肺部疾病（bìng），包括急性肺（fèi）損（sǔn）傷（ALI）和肺纖維化方麵仍具有極高的價值。治（zhì）療（liáo）方（fāng）法是諸多肺部疾病研（yán）究（jiū）的核（hé）心，其中口咽吸入法（fǎ）（OPA）已被廣泛用，但其缺點是部分藥劑可能被吞入胃腸道，從而導致給藥劑量的不準確；另一（yī）種是經氣管給藥，這涉及到在深度麻醉狀態下切開氣管直接將藥物注入到呼吸道，然而，這種操作不僅因其侵入性和造成呼吸道損（sǔn）傷而不可取，還存在耗時過長，且操作者需要大量的訓（xùn）練等問題。

1999年（nián），Brown等人發表研究論（lùn）文描述了一種小鼠肺部（bù）直接插管的方法，後（hòu）續也有其他幾篇論文描（miáo）述了不同的小鼠肺部插管方法，但這種插管（guǎn）的主要問題是：當插管（guǎn）導管（guǎn）接近氣管並準備插入時，導管（guǎn）本身會阻擋（dǎng）光（guāng）線（xiàn），從而無法看清需要插入的（de）位置。

本文展示了如何簡單、低成本地消除這個可（kě）視化問題，從而確保在相對少的培訓或（huò）經驗下成功進行插管。

方法

準備（bèi）：

1、導管。對於20-35 g小鼠的插管，我們使用1或1.5英寸長（zhǎng），20 g IV導管(BD Insylte, Sparks, MD或Jelco Optiva, Carlsbad, CA)。可（kě）以為每隻小（xiǎo）鼠使用新的無菌導管，但（dàn）導管也可以在消（xiāo）毒後用70%乙醇浸泡過夜重複使用。盡管小鼠（shǔ）的咽部和氣管不是無菌的，但應（yīng）遵循（xún）適當的清潔程序，包括使用無（wú）菌手套和器械。

2、光（guāng）纖電纜。我們使用約70厘米長、0.5毫米粗的Edmund Optics光（guāng）纜，但長度不（bú）是決定性的因（yīn）素。重要的是要確保纖維的邊緣是平滑（huá）的（de），因為在用剃刀切割電纜後（hòu），邊緣相對較銳利，很容易刺穿氣管壁。然而隻需將光纖端部放在1000粒度的（de）砂（shā）紙上，就可以非常容（róng）易地打磨平這個邊緣（yuán）。另（lìng）一端插入橡膠塞（sāi）中（zhōng）。最簡便（biàn）的方法是先用18號針通過橡膠（jiāo）塞，插入光纖通過針孔，然後（hòu）撤出針。橡（xiàng）膠塞（sāi）連接150瓦鹵素光源（yuán）。重要的是要確保使用矽膠橡膠塞(或其他耐熱材料（liào）)，因為普（pǔ）通橡膠或軟木在（zài）靠近熱光源時可能會燃燒。

插管：

1、參見圖1和2。通過一段短矽橡膠管(ID≈0.8 mm×OD 4mm, Cole-Palmer, EW-96410-13)插入光纖（xiān）電纜（lǎn）。將這個橡膠管係緊，同時（shí）仍然允（yǔn）許調整光纖電纜。將矽膠管緊密地插入套管的魯爾端（duān），固定（dìng）光纖電纜在套管內的位置。調整光纖電纜的位置（zhì），使其在套管尖端前（qián）方約4毫米處穿過套管。

圖1.如圖所示（shì），光纜插入矽橡膠塞中，與（yǔ）其相對的另一端緊綁著一小（xiǎo）段矽橡膠管。

圖2.圖（tú）片展示了橡膠塞與光源的連（lián）接，光纖的（de）另一端穿過插管導管。左側還展示了一個簡單的支架，用於在插管過程中固定小鼠（shǔ）。

2、將麻醉後的小鼠放置在（zài）垂直支架上，由其上切（qiē）牙懸掛(圖3)。大多數研（yán）究者發現，當小（xiǎo）鼠的腹側麵向自己（jǐ）時，視覺效果最佳。非常（cháng）輕柔地拔出（chū）舌頭，用拇指（zhǐ）和食指握住。中指放（fàng）在頸部和塑料支架之（zhī）間。利（lì）用食指和（hé）拇指對舌頭的牽引（yǐn）開啟口腔，並用頸部後方的中指調整頭部的角度，使插管（guǎn）路徑伸直，如圖3所示。

圖3.兩個視（shì）角展示了（le）準備（bèi）插管的小鼠位置

3、使用光纖（xiān）電纜作為光源和導入器，推動它通過可視化聲帶。如果看不到聲（shēng）帶，可（kě）以通過中指作為支點，輕輕用力拉舌（shé）頭。插入（rù）後，將套管再（zài）向前推（tuī）進約5 mm。然後，小心不要移動套管，拔出光纖電纜。將小鼠平躺下來，用膠帶固定（dìng）導管，並用橡皮泥(塑型黏土)支撐導管接頭，如圖4所示。

圖4。此圖展示了一隻準備通（tōng）氣的已插管小鼠（shǔ）。圍（wéi）繞嘴部的膠帶有助於防止（zhǐ）導管移動。一（yī）小塊橡皮泥(建模黏土)提（tí）供了一（yī）個便利的支撐點，用於固定導管接頭與呼吸（xī）機的連接。

4、步驟3中的操作不容易演示或教學，因為這是一個單獨的操作（zuò）。然而，通過對舌頭的牽（qiān）引力和頭部後麵的支撐的微妙調整，幾乎所有嚐試這種方法（fǎ）的人都會（huì）很快找到正確的方式來調整小鼠的位置，使聲（shēng）帶可視化。

總結

本文描述的方法有幾個優點。首先，裝置簡（jiǎn）單且價格低廉。製作裝置不需要任何（hé）特殊工具或（huò）昂貴的（de）設備。在實踐中，對於從未嚐試過插管的研究（jiū）員、學生和技術人員來說更容易掌握（wò）。

在（zài）進行（háng）插管時，有（yǒu）幾個實際問題需要提及。在最初（chū）打開小鼠口腔時，盡量輕柔拉舌頭非常重要。如果使用無（wú）保護鉗，很容易損（sǔn）傷舌頭，這（zhè）可能導致小鼠死亡。在首次學習如何插管時，最重要的是使用頸部後（hòu）方的手指（zhǐ）來調整頭部角（jiǎo）度，以使氣管開口的可視化。如果操作正確，對舌頭進（jìn）行足夠的牽（qiān）拉，很容易看到聲（shēng）帶。最初的可（kě）視化步（bù）驟通常需要最多的時間，因為一旦看到（dào）氣管開口，插入纖維電纜和靜脈導管（guǎn）就相對簡單了。

總之，本文描述的插管方法製（zhì）作成（chéng）本低，使用簡單（dān），可以令大多數研究人員和實驗室技術（shù）人員在相對較少的經驗下（xià）快速掌握小鼠（shǔ）插管技術。